- 產(chǎn)品品牌： REAGEN
- 產(chǎn)品貨號： RND99131
- 產(chǎn)品規(guī)格： 48/96T
- 產(chǎn)品適用： 適用于利福平檢測
- 產(chǎn)地來源： 中國深圳
- 試劑盒組成： 檢測試劑、說明書
- 保質(zhì)期： 12個月
本測試盒用競爭免疫分析法定量測定細(xì)胞培養(yǎng)液中的利福平。該測試盒反應(yīng)孔可拆卸，可測單份樣品，也可測多份樣品。定量分析時需有含450nm波長的微孔板酶標(biāo)儀。
1 概要
利福平（Rifampicin）一種廣譜抗生素藥物，對結(jié)核桿菌有較強抗菌作用，對革蘭氏陽性或陰性細(xì)菌、病毒等也有療效，主要用于治療結(jié)核病、腦膜炎和金黃色葡萄球菌感染，外用可治療沙眼等。
2 測定原理
本測試盒利用固相酶聯(lián)免疫吸附原理，采用間接競爭ELISA法進行測定。用抗原包被微孔板，加入利福平標(biāo)準(zhǔn)品或樣品、抗利福平酶標(biāo)單克隆抗體進行免疫反應(yīng)后，將未與包被抗原結(jié)合的抗體洗去；再加入酶標(biāo)記的抗鼠IgG抗體孵育，加入顯色液，經(jīng)終止液終止后，用酶標(biāo)儀在450nm處測定OD值。
3 提供的物品
微孔板
6個濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（各0.5mL）
標(biāo)準(zhǔn)1：0ng/mL ……………………………………………………………........直接使用
標(biāo)準(zhǔn)2：1.0ng/mL ………………………………………………………................直接使用
標(biāo)準(zhǔn)3：2.0ng/mL ……………………………………………………........…........直接使用
標(biāo)準(zhǔn)4：5.0ng/mL ……………………………………………………........…........直接使用
標(biāo)準(zhǔn)5：20.0ng/mL ………………………………………………………........直接使用
標(biāo)準(zhǔn)6：50.0ng/mL …………………………………………………….......….直接使用
抗體溶液(6mL) …………………………………………………………………直接使用
酶標(biāo)物(12mL) …………………………………………………………………直接使用
顯色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用
終止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用
10X濃縮洗液(30mL) ……………………………………………………………稀釋使用
4 盒中未提供，需自備物品
微孔板酶標(biāo)儀（含450nm）、去離子水或蒸餾水。
5 操作者注意事項
終止液為0.5M硫酸，避免接觸皮膚。每次加樣后立即將所有試劑放回2~8 ℃。每步加樣時間應(yīng)控制在5min內(nèi)。孵育過程中應(yīng)避光。不要使用過期試劑盒。不要交叉使用不同批號的試劑盒中的試劑。
6 儲存條件
保存試劑盒于2~8℃。不要冷凍
顯色液對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
將不用的微孔板放進原鋁箔袋中，置2~8℃保存。
7 試劑變質(zhì)的標(biāo)志
標(biāo)準(zhǔn)1的吸光度值小于0.5個單位（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。
8 樣品處理
----細(xì)胞培養(yǎng)液無需前處理，直接進行測定
9 酶免疫分析程序
----濃縮洗液為10倍濃縮液，使用時與去離子水或蒸餾水按體積比1:9稀釋后使用。
----取所需數(shù)量的板條插入微孔架，記錄樣品及標(biāo)準(zhǔn)的位置。
----加入50mL標(biāo)準(zhǔn)品或處理好的樣品到微孔，每個標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。
----加入50mL利福平單克隆抗體溶液到每個微孔中（注意移液器管尖不要接觸到孔中的液體，避免交叉污染），37℃孵育90min。
----甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。
----每孔加入酶標(biāo)物100mL，37℃孵育60min。
----甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。
----每孔加入顯色液100mL，37℃孵育15 min。
----每孔加入終止液50mL，立即用酶標(biāo)儀在波長450nm處測定吸光度值（OD值）。
10 樣品濃度計算
以標(biāo)準(zhǔn)溶液OD值與標(biāo)準(zhǔn)1的OD值的比值為縱坐標(biāo)，所對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（ng/mL）的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣品OD值與標(biāo)準(zhǔn)1的OD的比值，可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo)，即為利福平濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中利福平濃度C（ng/mL）
11 主要技術(shù)指標(biāo)及參數(shù)
11.1 最低檢出濃度1.0 ng/mL。
11.2 加標(biāo)回收率在70-120%，條內(nèi)變異系數(shù)＜10%，條件變異系數(shù)＜15%。